Контакты по тел.: +7-925-267-32-00

Ренат Рашитович Ахмеров

Доктор медицинских наук
разработчик системы Плазмолифтинг®

Изменение морфологических и функциональных параметров тромбоцитов при их хранении в течение 24 часов.

Braune S.1, Walter M.1, Schulze F.2, Лендляйн А.1, Jung F.2

Автореферат

На сегодняшний день не существует единых и стандартизированных протоколов приготовления обогащенной тромбоцитами плазмы (PRP) для исследований in vitro, в рамках которых осуществляется оценка взаимодействия тромбоцитов с материалами для имплантации. Данное обстоятельство приводит к получению несоответствующих между собой результатов, что обусловлено многообразием применяемых протоколов. В частности, существуют данные о том, что старение тромбоцитов в ходе пролонгированной процедуры приготовления и хранения может стать причиной недооценки тромбогенности материала. В настоящем исследовании мы изучали влияние продолжительности хранения цельной крови и PRP на морфологические и функциональные параметры тромбоцитов и оценивали их изменения. Забор крови у клинически здоровых пациентов осуществлялся согласно стандартизированному протоколу. Исследование полученных образцов крови проводилось сразу же после их забора, а затем - через четыре и двадцать четыре часа. Способность тромбоцитов склеиваться и формировать устойчивые агрегаты (PFA100, время, необходимое для образования сгустка) оценивалась в стабилизированной цитратом натрия цельной крови (ЦК) с использованием агонистов конского коллагена типа I и эпинефрина битартрата (коллаген/эпинефрин), а также конского коллагена типа I и аденозин-5'-дифосфата (коллаген/АДФ). Количество циркулирующих тромбоцитов подсчитывалось в каждой точке времени. Морфология тромбоцитов и их агрегаты исследовались при помощи микроскопа, а количественный анализ проводился с использованием многоканальной системы подсчета, принципом работы которой является анализ площади электрического импульса (CASY). Процентная доля активированных тромбоцитов определялась посредством оценки экспрессии P-селектина (CD62P) на поверхности циркулирующих тромбоцитов. Кроме того, в каждой точке времени оценивалось выделение тромбоцитарного фактора 4 (PF4) в обедненной тромбоцитами плазме (PPP). Количество времени, необходимое для образования сгустка в цельной крови, которое определялось посредством PFA100, увеличилось после стимуляции коллагеном/АДФ и коллагеном/эпинефрином. Через двадцать четыре часа после забора крови наблюдалось патологическое увеличение значений обоих параметров, выходивших за пределы верхней границы нормы. Уровень циркулирующих тромбоцитов, определяемых в PRP, снизился через четыре часа после забора крови, однако при исследовании, проводимом через 24 часа, дальнейшего уменьшения их количества не наблюдалось. Значения среднего объема тромбоцитов (MPV) и коэффициента больших тромбоцитов (P-LCR, 12 фл - 40 фл) уменьшались в динамике по времени. Дебриса или агрегатов тромбоцитов непосредственно после забора крови микроскопически не выявлялось. Через четыре часа после забора крови визуализировались первый дебрис и очень небольшие агрегаты тромбоцитов. В течение 24 часов агрегаты тромбоцитов и дебрис поступательно увеличивались. В связи с чем системой CASY было выявлено увеличение агрегатов тромбоцитов (диаметром до 90 мкм) с увеличением срока хранения. В PRP без добавления активатора в течение срока ее хранения значительно увеличилась процентная доля тромбоцитов с экспрессией CD62P и PF4. При добавлении в образцы PRP растворимого АДФ количество активируемых тромбоцитов за период хранения значительно уменьшалось. В настоящем исследовании была выявлена необходимость стандартизации протоколов приготовления ЦК и PRP. Морфологические и функциональные параметры тромбоцитов, в частности реактивность тромбоцитов на адгезивные или растворимые агонисты в их окружающей среде, вне сосудистой системы быстро изменялись. Полученные данные имеют важное значение, в частности для отрасли разработки биоматериалов, применяемых в сердечно-сосудистой хирургии, а также могут быть полезными при составлении общих стандартов испытаний гемосовместимости биоматериалов in vitro.

Clin Hemorheol Microcirc. 1 января 2014 г.;58(1):159-70.

Рассылка профессора Ахмерова
Подписаться письмом